串联亲和纯化TAP-MS—服务到投稿

串联亲和纯化质谱TAP-MS技术原理

过表达TST-Flag双标签融合蛋白的细胞，经裂解后先与Streptactin珠子孵育、初次洗涤及洗脱，释放出蛋白复合物；再将此蛋白复合物与anti-Flag珠子结合、再次洗涤，zui后的洗脱产物用质谱鉴定未知的互作蛋白。



串联亲和纯化质谱TAP-MS实验流程


串联亲和纯化质谱TAP-MS技术应用


筛选内源性的和诱饵蛋白互作的蛋白



几种蛋白互作技术特点

1. GST pulldown：体外表达诱饵蛋白，简单易行，适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况；

2. AP-MS：体内表达带标签的诱饵蛋白，洗脱产物无抗体污染，适合无IP级别抗体、但易转基因的情况；

3. TAP-MS：体内表达带双标签的诱饵蛋白，两次纯化，非特异结合蛋白更少，适合无IP级别抗体、但易转基因的情况；

4. CoIP：基本是天然蛋白复合物分离，能比较好的反应体内真实的蛋白互作情况，适合于有非常好的IP级别抗体的情况；

5. SILAC-IP：可定量鉴定分析体内蛋白复合物，适合于可传代细胞，尤其是易转基因细胞。



串联亲和纯化质谱TAP-MS服务—辉骏优势

1. 近十年服务经验，服务客户众多；

2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻，擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议；

3. 自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行you质的实验路线；

4. 自有蛋白质组学平台，对微量TAP实验产物的质谱鉴定有十足的把控能力，对后续的生物信息分析有独到的见解；

5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心免疫共沉淀下游实验及投稿。



串联亲和纯化质谱TAP-MS服务信息

项目名称	客户提供	结果交付	实验周期
TAP MS	细胞样本 诱饵蛋白编码区基因模板 实验信息表	1、诱饵蛋白的双标签慢病毒表达载体 2、诱饵蛋白WB检测图 3、质谱检测结果 4、生物信息学分析结果 5、实验报告	14-16周

TAP-MS实验—客户文献

1. Reinaldo F.M. et al: Destabilizing NEK2 overcomes resistance to proteasome inhibition in multiple myeloma. The Journal of Clinical Investigation.2020 , IF=11.864. 【研究内容】：每个骨髓瘤患者都有多个亚克隆，具有高或低染色体不稳定性(CIN)特征的多个亚克隆共存会导致异质性和耐药性，导致疾病复发。作者通过串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术，发现了CIN基因NEK2与脱泛素酶USP7结合。该结合阻止了NEK2泛素化并使其稳定。研究发现，使用NEK2或USP7抑制剂进行靶向治疗可能是骨髓瘤zui有效的辅助治疗方法。 使用技术：串联亲和纯化质谱(TAP-MS)

2. Li X.et al: Proteomic ana lyses reveal distinct chromatin-associated and soluble transcription factor complexes.Molecular Systems Biology.2015 , IF=8.991.【研究内容】：转录因子(TF)是细胞信号通路的靶标和执行者。在这项研究中，作者对56个TF的可溶性和染色相关复合物进行了蛋白质组学分析，利用串联亲和纯化和质谱(TAP/MS)技术进行纯化，并鉴定其中的蛋白质-蛋白质相互作用。研究为大量的TF提供了有价值的蛋白质-蛋白质相互作用网络资源，强调了TF形成不同位置特异性的蛋白质复合物的一般原理，这些复合物与TF的不同调控和不同功能有关。 使用技术：串联亲和纯化质谱(TAP-MS)

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